Puedes hacerlo de dos formas:
- Comprobar uno por uno (en un bucle por ejemplo) mediante el Checked, tipo: radiobutton.Items[0].Checked
- La opción óptima:
SelectedIndex
Con la primera podrás comprobar de forma individual si uno en concreto no lo está. Con la segunda podrás si no tienes habilitado el que puedan marcar más de una opción (entiendo que no).